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科樂福clover TC-M160多功能凈化柱
飼料中黃曲霉,，玉米赤霉烯酮和T-2毒素的測定
--－LC-MS法
1.使用對象
本方法參考NY/T2071-2011，試樣中的黃曲霉毒素,，玉米赤霉烯酮和T-2毒素經(jīng)乙腈溶液提取,，正己烷脫脂及多功能凈化柱凈化后，氮氣吹干,，甲酸乙腈溶液溶解,，液質(zhì)法測定。
本方法黃曲霉毒素與T-2毒素的檢測限為1.0ug/kg,，定量限為2.0ug/kg；玉米赤霉烯酮的檢測限為5.0ug/kg,，定量限為10.0ug/kg,。
GB13078-2017飼料衛(wèi)生標準中規(guī)定：
黃 曲 霉 毒 素 B1 ug/kg | 飼料 原料 | 種類 | *（ug/kg） | 方法 |
玉米加工產(chǎn)品，花生餅（粕） | ≦50 | NY/T 2071 | ||
植物油脂（玉米油,，花生油除外） | ≦10 | |||
玉米油,，花生油 | ≦20 | |||
其他植物性飼料原料 | ≦30 | |||
飼料 產(chǎn)品 | 仔豬，雛禽濃縮飼料 | ≦10 | ||
肉用仔鴨后期,，生長鴨,，產(chǎn)蛋鴨濃縮飼料 | ≦15 | |||
其他濃縮飼料 | ≦20 | |||
犢牛，羔羊精料補充料 | ≦20 | |||
泌乳期精料補充料 | ≦10 | |||
其他精料補充料 | ≦30 | |||
仔豬,，雛禽配合飼料 | ≦10 | |||
肉用仔鴨后期,，生長鴨，產(chǎn)蛋鴨配合飼料 | ≦15 | |||
其他配合飼料 | ≦20 |
玉 米 赤 霉 烯 酮 mg/kg | 飼料 原料 | 種類 | *（mg/kg） | 方法 |
玉米及其加工產(chǎn)品(玉米皮,，噴漿玉米皮,，玉米漿干粉除外) | ≦0.5 | NY/T 2071 | ||
玉米皮，噴漿玉米皮,，玉米漿干粉,，玉米酒糟類產(chǎn)品 | ≦1.5 | |||
其他植物性飼料原料 | ≦1 | |||
飼料 產(chǎn)品 | 犢牛,，羔羊，泌乳期精料補充料 | ≦0.5 | ||
仔豬配合飼料 | ≦0.15 | |||
青年母豬配合飼料 | ≦0.1 | |||
其他豬配合飼料 | ≦0.25 | |||
其他配合飼料 | ≦0.5 |
T-2 毒 素 mg/kg | 種類 | *（mg/kg） | 方法 |
植物性飼料原料 | ≦0.5 | NY/T 2071 | |
豬,，禽配合飼料 | ≦0.5 |
2.實驗準備
2.1溶液配制
甲酸溶液（0.1%）：準確量取甲酸1ml,，加水至1000ml，搖勻即得,。
乙酸溶液（0.02%）：準確量取冰乙酸0.2ml,，加水至1000ml，搖勻即得,。
甲酸乙腈溶液：取甲酸溶液50ml,，加乙腈至100ml，搖勻即得,。
2.2混合標準儲備液：
分別吸取一定量的6種真菌毒素標準品于棕色容量瓶中,，用甲醇配成濃度為1ug/ml的混合儲備液，保存于4℃冰箱中,。
2.3基質(zhì)標準工作液：
分別吸取一定量的真菌毒素標準儲備液,，添加空白樣品提取液，氮氣吹干后,，用流動相稀釋成濃度為1.0ug/L,5.0ug/L,10.0ug/L,50ug/L,100ug/L,200ug/L的混合標準系列工作液,，臨用新配。
3.樣品的前處理
（1）稱取5g±0.02g飼料樣品于50ml離心管中,，準確加入25ml提取液（乙腈：水=84：16）,，渦旋混勻2min，置于超聲波清洗器中超聲提取20min,，中間振蕩2-3次,。
（2）取出，于8000r/min離心5min,，傾出上清液至分液漏斗中,，加入15ml正己烷，充分振蕩,。待靜止分層后,，準確量取下層液5ml，待用,。
（3）將上述5ml液體,，過多功能凈化柱，控制流速為2ml/min,，收集流出液,，在60℃氮氣下吹干。
（4）用1.0ml甲酸乙腈溶液溶解殘渣，渦旋30s,，經(jīng)0.22um濾膜過濾后,，上機檢測。
4 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法
4.1液相色譜條件
色譜柱： C18柱,3.0×150mm（3.0um）,；或其他等效色譜柱,。
柱溫：33℃
進樣量：20ul
流動相，流速見下表,。
a.ESI+源梯度洗脫條件
時間,，min | 流速，mL/min | 甲酸溶液,，% | 甲醇/乙腈（1：1） | 曲線（curve） |
0 | 0.3 | 70 | 30 | 1 |
4.0 | 0.3 | 55 | 45 | 6 |
14.0 | 0.3 | 0 | 100 | 6 |
15.0 | 0.3 | 0 | 100 | 6 |
15.1 | 0.3 | 70 | 30 | 6 |
a.ESI-源梯度洗脫條件
時間,，min | 流速，mL/min | 乙酸溶液,，% | 甲醇/乙腈（1：1） | 曲線（curve） |
0 | 0.3 | 70 | 30 | 1 |
8.0 | 0.3 | 10 | 90 | 6 |
13.0 | 0.3 | 10 | 90 | 6 |
13.1 | 0.3 | 70 | 30 | 6 |
20.0 | 0.3 | 70 | 30 | 6 |
4.2 質(zhì)譜條件
a離子源：電噴霧離子源,。
b掃描方式：正離子掃描模式和負離子掃描模式。
c檢測方式：多反應監(jiān)測,。
d脫溶劑氣,，錐孔氣均為高純氮氣，碰撞氣為高純氬氣,，使用前應調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈敏度達到檢測要求,。
e毛細管電壓，錐孔電壓,，碰撞能量等電壓值應優(yōu)化至靈敏度,。
f定性離子對，定量離子對,，保留時間及對應的錐孔電壓和碰撞能量參考值見下表
a.ESI +監(jiān)測模式
真菌毒素名稱 | 保留時間min | 定性離子對m/z | 定量離子對m/z | 錐孔電壓V | 碰撞能量eV |
黃曲霉毒素B1 | 13.7 | 313.1>241.1 313.1>285.1 | 313.1>241.1 | 39 | 32 20 |
黃曲霉毒素B2 | 13.2 | 315.1>259.1 315.1>287.0 | 315.1>259.1 | 44 | 28 24 |
黃曲霉毒素G1 | 12.6 | 329.0>243.1 329.0>283.1 | 329.0>243.1 | 40 | 26 24 |
hunag曲霉毒素G2 | 12.0 | 331.0>245.1 331.0>217.1 | 331.0>245.1 | 42 | 32 20 |
T-2毒素 | 16.0 | 489.1>245.2 489.1>387.1 | 4489.1>245.2 | 38 | 25 21 |
b.ESI-監(jiān)測模式
真菌毒素名稱 | 保留時間min | 定性離子對m/z | 定量離子對m/z | 錐孔電壓V | 碰撞能量eV |
玉米赤霉烯酮 | 13.4 | 317.0>175.1 317.0>273.1 | 317.0>175.1 | 40 | 26 26 |
5.定性測定
在相同實驗條件下,，樣品中待測物質(zhì)保留時間與標準溶液保留時間的偏差不超過標準溶液保留時間的±2.5%，且樣品中各祖墳定性離子的相對豐度與濃度接近的標準溶液中對應的定性離子的相對豐度進行比較,，偏差不超過下表的范圍，可判定樣品中存在對應的待測物,。
定性確證時相對離子豐度的大允許偏差（%）
相對離子豐度 | >50 | >20-50 | >10-20 | ≦10 |
允許的大偏差 | ±20 | ±25 | ±30 | ±50 |
6.定量測定
在儀器工作條件下,，混合標準工作液與試樣交替進樣，采用基質(zhì)匹配標準溶液校正,，外標法定量,。
科樂福clover TC-M160多功能凈化柱
品牌：科樂福clover
